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BL21(DE3)感受态细胞

文字:[大][中][小] 2018-10-12  浏览次数:11

 

BL21(DE3)感受态细胞

BL21(DE3)感受态细胞

应用                                                                         
» 细胞体外培养
产品特性

» GMP级生产环境

» CHO稳定细胞株表达
» 无血清培养基生产
» GE Wave生物反应器培养

 

BL21(DE3)感受态细胞产品编号、规格、价格

 

 

产品信息

 

BL21(DE3)感受态细胞 是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白,该菌株是以T7 RNA 聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。T7噬菌体RNA 聚合酶基因的表达受λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子调控,该区整合在BL21染色体上。使用pUC19质粒检测,转化效率可达10e7

 

操作步骤

 

1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。以下实验以50 μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
342℃热击90秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450 μl无菌的SOCLB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOCLB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。

* 注意:

1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm2分钟)后吸除部分培养液,悬浮 菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

注意事项

 

1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、
包装中有0.1 ng/μlpUC19DNA,供对照试验使用。

 

保存条件   -80℃

 

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